Prerequisiti
Cellula procariota, struttura del DNA, plasmidi, enzimi di restrizione, funzione dei primer e della DNA polimerasi, sintesi delle proteine.

Obiettivo
Verificare la presenza, in alimenti di origine vegetale, di elementi di controllo, associati a modificazioni genetiche, come il promotore P35S appartenente al Virus del Mosaico del Cavolfiore (CaMV).

Descrizione
L' esperimento, condotto su farine vegetali, prevede l'individuazione di un frammento del P35S, e si articola in tre fasi: estrazione e purificazione del DNA dei campioni in esame, amplificazione della sequenza nucleotidica indagata attraverso la PCR e sua analisi tramite gel elettroforesi.

 

Il P35S è una sequenza nucleotidica che consente all'RNA polimerasi di trascrivere il gene ad essa associato. Nei casi di manipolazione del DNA è necessario abbinare al gene, che viene inserito nel genoma della cellula ospite, un promotore che garantisca l'espressione fenotipica. Promotore e gene vengono trasferiti nell'ospite previo inserimento in un plasmide vettore, in grado di veicolare il costrutto (promotore-gene) nell'organismo bersaglio.

Conclusioni
Se nel gel elettroforetico è presente una banda identificabile con il frammento di 195 bp, si può concludere che il prodotto analizzato contiene un frammento del P35S, associato al gene esogeno, e quindi il vegetale di provenienza è un OGM. Se non appare nessuna banda si può concludere che il prodotto in esame non è stato manipolato. Come controllo della corretta esecuzione, si analizza anche una sequenza nucleotidica che fa parte del corredo genetico dei plastidi (cloroplasti, cromoplasti…), presenti in tutte le cellule vegetali. Questa sequenza, che si trova all'interno del gene trnL (gene legato alla sintesi delle proteine), subisce le stesse procedure a cui viene sottoposto il P35S; se nel gel appare una banda di circa 500 bp (il numero delle basi varia secondo la specie), l'esperimento è stato condotto correttamente.